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阻湿态微生物穿透仪试验操作方法

阻湿态微生物穿透仪

湿态阻菌测试仪又称为“ 阻湿态微生物穿透性测试仪”,RULLA 2湿态阻菌测试仪系国际标准ISO 22610 对阻湿态微生物穿透试验的指定仪器,也是中国国家食品药品监督管理局标准YY/T 0506.6阻湿态微生物穿透试验方法指定实验仪器。

工作原理:

用钢环将三层材料(试验材料在下,菌片居中,高密度聚乙烯膜在最上面)卡在一起,将此环套件置于转盘上的琼脂培养皿上,试验指以能在整个培养皿表面上移动的方式使材料受到压力和摩擦的综合作用,以此模拟在实际应用过程中屏障材料可能发生的受力情况和湿态条件下的微生物穿透。菌片上的微生物穿透试验材料后会迁移到琼脂培养基表面,通过对琼脂培养皿的培养和菌落计数,可对试验材料的穿透性能进行定量评价。

基本结构:

该仪器有一个电驱动、电子计时器控制、转速为60rpm的转盘,转盘上可安装一个14cm直径的琼脂培养皿。带有试验指的平衡杆被一个转速为5.60rpm的偏心轴所引导,可使重力为3±0.02N的试验指从转盘的中心向周边作侧向的往复运动。在一个试验周期内,两个运动的叠加,能使试验指的作用轨迹均匀布满整个圆盘表面。总重量为800±1g的内外钢环在试验中用以夹持供试材料并对材料施加标准的绷紧力。仪器还附带一个直径9cm、高4cm的圆柱体,用于在三层材料的固定过程中提供平整的表面和统一的绷紧度。

阻湿态微生物穿透仪

试验方法:

1 菌片制备

金黄色葡萄球菌ATCC 29213在胰酶大豆琼脂上36℃±1℃下培养18-24h,将2-3个菌落接种至3ml胰酶大豆肉汤中,在36℃±1℃下培养18-24h。用蛋白胨水1:10稀释至浓度为1×104CFU/mL~4×104CFU/mL,对最终菌悬液进行计数。

打开无菌袋取出仍贴附在智商的聚氨酯膜,将载菌材料片的可浸湿聚氨酯膜面朝上放在洁净度盘子上,为了便于操作,用双面胶带将载菌材料片的四角固定于盘子上。用培养皿盖作为模板在载菌膜上化出一个相应的区域,在该区域涂布1.0ml金黄色葡萄球菌悬浮液,然后将菌片到56℃干燥大约30min,在干燥期间采用消毒的玻璃涂布器在载菌膜上继续涂布菌悬液,以使菌液均匀分布。

菌片制备好后当日使用。

2 状态调节

如需要,按照GB6529对试件进行状态调节,也可在标准正常室温条件下进行状态天界和试验。状态调节的方法应记录在试验报告中。

3 试验设定

调节控制杆上配重,使试验指施加到琼脂上的力值为3N±0.02N。

将一个琼脂培养皿放在转盘上。

4 材料应用

用下列计数:采用一个由内、外环组成的圆形砝码,总重800g±1g对材料施加标准的绷紧力。将圆柱放在内环中央,再将试件覆盖在圆柱体和内环上,将除去贴附纸后的菌片染菌面向下放在试件上。最后在聚氨酯膜上覆盖一层HDPE膜,向下推紧外环,使三层材料牢固的加在两个环之间。

5 试验

将上述环组件轻轻搭放在一个去下盖子的琼脂培养皿上,钢环自由悬放于旋转盘的外面,将试验指置于皿口内测的HDPE膜上,这样试件可与琼脂表面接触。试验指按上述规定施加3N压力,是仪器运行15min。

15min后立即取下环套件放在一边。

从旋转盘上取下一个培养皿并放上皿盖。马上将第二个培养皿和环套件放在旋转盘上。

对后面的四个培养皿用同一个环套组件执行上述步骤。

五个培养皿完成试验后,取下菌片并弃去,将试件反转,上面朝下用HDPE膜覆盖。

在第六个培养皿上操作15min,即完成一个平行试验组。

其余4片试件同样按上述方法各运行六个培养皿各15min,每片试件使用一片新鲜制备的菌片。

如果琼脂表面聚有液体,将其置于洁净台上干燥,将各琼脂培养皿加盖置于36℃±1℃培养48h。

计数每只培养皿中金黄色葡萄球菌菌落数,培养皿中心15min半径区域内的菌落数不计。

如果右一个皿或多个皿的计数大于750CFU(不包括上述的培养皿中心15min半径区域内的菌落数),可重新惊醒试验。如果重新试验仍有一个或多个皿计数大于750CFU,表明该材料不可能具有足够的屏障特性,可终止试验。

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